실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
RNA gel 좀 봐주세요
레벨2 pjy25n (대학원생)
안녕하세요
Bacteria (E.coli)에서 RNA extraction을 진행하였습니다.
TE buffer+Lysozyme+RNAse inhibitor를 넣고 lysis를 했고,
마지막에 RNA elution시에도 RNAase inhibitor와 EDTA를 추가했습니다.
샘플은 총 두 가지로 각각 다른 E.coli strain이었고
DNA digestion과 clean-up 후 260/280은 앞의 밴드 샘플이 1.82 두번쨰 밴드 샘플이 2.04였습니다.
일반 agarose gel에 로딩하였는데(2%사용_첫번째샘플:3ug, 두번째샘플:7ug), 밴드 두 줄이 나온 두번째 샘플과 달리 첫번째 샘플은 degradation이 된 것 같습니다.
첫번째 샘플에 대해 질문 있습니다.
1.gDNA 밴드가 나온 것으로 봐서 lysis는 된 게 맞지요?(DNA digestion 전에는 gDNA밴드만 상당히 굵게 나왔습니다)
2.RNAse inhibitor양을 늘려야할까요?
3. DNA digestion 했는데도 gDNA 밴드가 나오는 이유가 뭔가요? incubation time을 늘려야할까요?
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