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질문 HPLC 관련 질문 드립니다
올챙이연람(대학생)  | 04.01 20:42

upload_image

위 사진은 단일 물질(아세트아미노펜)을 MeOH에 녹이고, ACN:H2O=40:60으로 분석을 진행한 peak입니다. 단일 물질에서 2개의 피크가 나오는 경우를 구글링 해봤는데, peak splitting 말고는 다른 경우가 없는 거 같더군요. 구글링 결과 peak splitting의 사진과는 유사한 부분이 없어서 peak splitting은 아닌 거 같습니다. 

제 생각엔 단일 물질이 오염이 되서 2개의 피크가 발생했다기엔 2번째 피크의 Intensity가 너무 크게 나와서 단일 물질이 오염되기 보다는 다른 이유가 있다고 생각하는데, 이에 대해 답변주시면 감사합니다.

참고로 컬럼은 교체한지 2주일 정도가 지났으며, 컬럼 세척 조건은 ACN:H2O=75:25로 1시간 정도 진행합니다. 

다른 정보 필요하시면 답글 확인하여 필요한 정보 드리겠습니다.

#hplc
 
#peak splitting
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리cslee  |  04.03 15:20  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

시료주입부 오염되어 들어가는것같은데 시린지,바이얼 등 확인요함

일단 같은 이동상 에서도 나오나요??표준품순도는??

 

올챙이연람  |  04.03 16:22  

시료주입부 오염되어 들어가는것같은데 시린지,바이얼 등 확인요함

일단 같은 이동상 에서도 나오나요??표준품순도는??

 

시린지나 바이얼 등은 전부 새거 사용했고, 오염되지 않았을거라 생각합니다. 아세트아미노펜과 Methyl p-hydroxybenzoate을 같은 조건과 이동상을 사용해서 단일 분석을 진행했는데, 아세트 아미노펜만 알 수 없는 피크가 나왔구요. 

표준품은 시그마 알드리치에서 구매했고, 아세트 아미노펜의 순도는 99퍼 입니다. 

아세트 아미노펜과 Methyl p-hydroxybenzoate peak 사진은 https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=801627 이 링크 참고하시면 됩니다.

 

추가적인 질문은 링크 들어가보시면 methyl p-hydroxybenzoate peak 앞쪽에 조금만 peak 2개가 보이는데 단순한 오염인가요 ?

개구리cslee  |  04.03 17:21  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

앞에 조그만피크는 불순물이죠

올챙이연람  |  04.03 19:33  

아세트아미노펜은 외부 요인에 의해 오염됬을거라 가정하고, 새로운 표준품을 구매하여 확인을 해보겠습니다. 새로운 표준품으로 실험 후 문제가 발생하면 다시 질문 올리도록 하겠습니다.

개구리됴엥  |  04.06 10:00  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

안녕하세요 : ) 

답변드립니다. 

피크를 보아하니 농도가 너무 높게 찍히면 피크가 분리가 

잘 안이루어질 수도 있습니다. 

따라서 농도를 좀 낮춰서 찍어보시길 바라며, 혹은 Split 변경이 가능하면 

20 또는 10정도로 찍어보시면 좋을것 같습니다. 

추가로 ACN 이동상 비율을 조금 더 높이시면 분리도를 증가시켜 

좀더 깨끗한 Peak를 얻으실수도 있을 것입니다. 

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