부유세포를 thawing 하려고 하는데, 이러한 과정이 맞을까요?
1. cell stock을 water bath에서 약 2분간 최대한 빠르게 녹인다.
2. 125 ml flask에 20 ml media를 넣어 준 후 stock 안에 있는 cell을 모두 flask에 넣어준다.
3. 24 시간 정도 incubate
4. 새로운 125 ml flask를 준비하여 cell을 옮겨준다.
이때 cell down을 하지 않고 그냥 옮겨만 줘도 되나요?
3,4번은 안 해도 됩니다.
2번 미디어 볼륨은 cell density에 맞게 넣어주시면 되고
매일매일 density 측정하여 잘 늘어나는지 확인해주세요.
DMSO는 제거할 필요가 없이 저렇게만 하면 되나요?
stock할 때 들어가는 DMSO가 남아잇으면 세포에 toxic하므로
1번과정 후에 stock에 있는 셀을 10ml의 new media에 넣어 down한 번 시켜준 후 pellet만 flask에 seeding해주셔요~
DMSO는 1ml frozen stock에 많아야 10% 정도 들어있을 것이고 20ml 이상의 미디어에 희석되기 때문에 최종 농도가 1% 미만입니다.
판매되는 cell의 제조사 매뉴얼에도 DMSO 제거 프로토콜은 포함되어 있지 않으며, 경험상으로도 cell viability나 density에 영향을 주지 않았습니다.
https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=761401&modetype=mp&ksr=1&FindText=hybridoma%20cell
그렇군요.
갑론을박이 있는것 같습니다~
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