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Bradford protein assay 진행 시 sample dilution buffer
레벨4 솔로몬이꿈 (대학원생)
안녕하세요
석사 1학기차 실험 초보입니다.
펩타이드 발현 후 bradford protein assay를 통해 제 target peptide 정량을 진행하고자 합니다.
이때 sample을 10배 정도 희석해서 측정해보고자 하는데요.
sample은 crude cell extract, soluble, insoluble, insoluble을 가용화시킨 sample 로 총 4개입니다.
cell lysis를 진행한 후에 제 target peptide가 inclusion body형태로 형성되기 때문에 insoluble protein을 8M urea, 20mM tris, 500mM NaCl, 50mM imidazole, pH 7.4로 solubilization을 진행해줍니다.
때문에 bradford를 진행할 때 조건을 똑같이 하기 위해 희석할 때 buffer를
1. d.w를 써야 할지 아니면
2. 제가 cell lysis 할 때 사용한 50mM sodium phosphate buffer를 써야하는지
3. solubilization에 사용한 buffer를 써야할지
판단이 잘 서지 않아 질문드립니다.
사용하는 buffer가 단백질 정량에 영향을 줄까봐 걱정 되는데 판단 기준이 무엇인지 잘 모르겠습니다.
도움 부탁드립니다! 감사합니다!
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