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1. Bacillus가 특별히 염색이 잘 안되는 균이 아닙니다.
2. 다른 G(+)균과 동시에 염색해도 결과가 잘 안나오나요?
3. 혹시 염색이 잘 안된 사진있나요?
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레벨1
boulardii
(대학생)
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23.05.30 13:07
잘 나온 사진만 보관하다 보니 인터넷으로 최대한 비슷한 사진을 찾았습니다. 위의 사진보다 살짝 어둡게 나오는 편이고 이런 결과물이 나왔을 때 그람양성이라는 설득력이 부족하다고 생각됩니다.
다른 균이랑 같이 (물론 다른 슬라이드에) 실험해봐도 B.subtilis가 심한 편이네요. 여러 논문을 찾고는 있는데 B.subtilis가 gram-negative-like PG layer를 형성할 수 있다고 해서 더 알아보는 중입니다...
- 실제 실험한 사진이 필요합니다만. 판단하기가 힘드네요.
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asdf
(비회원)
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23.05.30 16:29
에탄올 처리 후에 탈색 된 상태인지, 보라색 그대로 있는지 확인해보셔요
1. 탈색되었으면 크리스탈 바이올렛-아이오딘 중합체가 펩티도 글리칸 층에 남아있지 않은겁니다. colony 따서 PBS-centri wash 2회정도 한 pellet으로 다시해보셔요. bacillus subtilis는 세포 외부로 점액성물질을 내뿜습니다. 이 점액성 물질이 그람염색에 영향을 줄 가능성이 없잖아 있어요
2. 탈색 안되어있으면.. 사프라닌이 너무 진하거나 형광현미경의 광원으로 인해 붉게 보일수도있구요. 근데 유독 bacillus subtilis만 붉게 나온다 하니 위 확률은 낮겠네요
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레벨1
boulardii
(대학생)
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23.05.31 17:29
이런 식으로 나옵니다.
B.subtilis가 내는 점액이 그람염색을 방해한다는 발상을 못하고 있었네요. 조만간 원심분리로 wash 시도해보겠습니다. 에탄올 세척 후에도 색은 남아있으며 다만 Lugol 용액 처리 후 보라색이 검은색으로 바뀌는 현상은 있습니다. 감사합니다
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레벨1
boulardii
(대학생)
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23.06.20 10:03
위의 두 분 모두 감사합니다.
Bacillus subtilis를 키웠던 배지 문제였던 것 같습니다.
전분한천배지에 키웠었는데 확실하진 않지만 그람염색을 하면서 Lugol solution이 전분 성분과 반응해서 색이 갈색으로 나온 것 같아요
덕분에 해결에 도움이 되었습니다.