실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
protein expression 문제..
레벨1 gnuoyh4941 (대학생)
안녕하세요. 석사과정중인 대학원생입니다. 다름이 아니라, protein expression이 잘 되지 않아 이렇게 질문드리게 되었습니다. 먼저, 타 연구에서 phagy display를 통해 만든 scFv의 3가지 variants들을, 제 연구에 사용하기 위해 sequence를 codon optimization한 뒤, gene합성을 하였습니다. 그 뒤 pET30b vector에 insertion하였고, 최종적으로 sequencing을 통해 mutation이 없는것을 확인하였고, BL21(DE3)에 transformation을 진행한 다음, iptg induction을 통해 expression 및 분리를 진행하였습니다. 문제는, variants 2개는 expression이 매우 잘 되지만, 나머지 하나는 expression이 전혀 되지 않는다는 것입니다.. 세 variants의 vector는 모두 동일한 template를 사용하였기 때문에, promoter나 항생제저항 유전자 등의 vector상의 문제는 아닐것 같다고 생각하고는 있습니다.. (중요한 건인지는 모르겠지만, 세 variants간의 아미노산 sequence가 서로 크게 다르지는 않습니다) 한가지 눈에 띄는 특징이라면, 제 목적의 protein이 expression이 안되는 경우 약 30kDa 근방에서 항상 높은 농도로 expression되는 정체불명의 protein이 있다는 것입니다. 이것은 이 세 variants에 국한된 것이 아니라, 제 실험에서 expression이 잘 되지않는 protein을 분리할 때 공통적으로 나타나는 특징이기도 합니다..이 현상을 해결하고자 다른 expression vector, BL21, induction 온도, IPTG 농도 등등 여러 조건을 바꾸어보았지만, 아직까지 해결이 되지 않고 있습니다. 서둘러 해결하여야 하는데, 무엇이 문제인지 도저히 감이 오지 않습니다.. 선배님들이 보시기에는 어떠한 문제때문에 이러한 현상들이 나타나는 것이라고 생각하시는지요..
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