pBluestript를 형질전환 시켰을 때는 콜로니가 많이 나왔습니다. 그러니 com. cell의 효율은 괜찮은 것 같습니다. 이론상 T-vector는 self ligation이 될 수 없습니다. 그러나 실제로 실험을 하면 self ligation이 일어나죠...
아마튼 transformation 했을 때 거의 colony자체가 뜨지 않았다면 ligation mixture에 ligase 저해물질이 포함된 것으로 보입니다.
insert인 PCR product를 깨끗이 정제하시고 ligation mixture에 insert의 볼륨 rate이 너무 높지 않도록 하시구요..
그럼 행운을 빕니다. |