실험 Q&A Plant Biology > Photosynthesis/Respiration
PCR수행시 multi band가 뜨는이유에 대해서..
레벨1 RANI
최근까지도 광합성유전자 psbA gene을 증폭하기 위한 조건으로서.
psbA유전자를 증폭시킨후, 그 양을 늘리기 위해서
2nd round까지 수행시켰을때. 딱 원하는 싸이즈의 psbA(800bp)만 잘나왔었습니다.
정말 아무런 문제없이 깔끔하게 원하는 싸이즈의 band만 떴었죠. (그게.아마 작년11월부터3월달까지 실험했을때 이 조건으로 문제없이 실험을 하였습니다.)
하지만. 몇달전부터 이러한 조건에서 문제가 생기기 시작했습니다.(4월부터 지금까지요)
1st round에서부터 원하던 psbA 의 band (800bp)말고도 200bp정도의 싸이즈의 밴드가 계속 증폭이 되기 시작하였습니다.
이렇게 증폭시킨 PCR 산물을 다시 2nd round 수행하였더니 1st PCR 때보다 더 진한 200bp밴드가 증폭되기 시작하였습니다. (때로는 500bp의 밴드고 뜰때도 있습니다...ㅠㅠ)
이러한 원치않는 밴드를 없애고자 시약도 다시 확인해보고 프라이머도 다시 주문해서
돌려보고 PCR기계도 이상이 있는지 확인해보고. 그랬는데도. 문제가 나아지질 않네요.
도대체 실험과정중.혹은 시약이라던지..어떠한 문제때문에 이렇게 갑자기 원치 않는 밴드가 형성이 되는것일까요?..
제 질문에 대해서 도움을 주시면 정말 감사하겠습니다..ㅠㅠ
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