소리마당 별별소리
2.4kb DNA PCR 조건질문드려요 !!
감감 (비회원)
한창 배우고 있는 학생인데요 ㅜㅜ 제가 똥손인건지 조건이 잘못된건지 실험 결과가 계속 이상하게 나오네요
V.vulnificus 내 2.4kb 정도 되는 유전자를 PCR하고 있는데 결과가 2.4kb 말고도 그 밑에 잔 밴드들이 4개 정도 계속 뜨네요,, Extension 시간이 잘못된건지 Annealing temperature가 잘못된건지 모르겠습니다 ㅜ 아니면 primer가 specific하지 않은건지,,
Tm값은 F.primer 59.2도 / R. primer 57.3도여서 annealing temperature는 53.2도로 맞췄습니다
Annealing 시간은 40초, Extension은 72도로 2분 30초동안 해서 총 35사이클 돌렸는데 뭐가 문제일까요,,
너무 실험 초반부터 막혀서 답답하네요 ㅠㅠ
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