안녕하세요.
qPCR을 처음 해본 학부생입니다.
qPCR 진행 후 Tm값 결과를 얻었는데, PCR mixture 양이 약간 부족했던 튜브만 Tm값이 살짝 다른 위치에 나왔는데 Tm값과 PCR mixture volume이 어떤 관계가 있는건지 궁금합니다!! Mixture 양이 아주 달랐던건 아닌데 이거 말고는 원인이 없는거 같습니다…
너무 궁금해서 계속 찾아봤는데, 구글링해봐도 잘 모르겠습니다ㅠㅜ
아직 부족한 부분이 너무 많습니다. 너그럽게 이해해주시고, 알려주시면 정말 감사하겠습니다 !!
두가지일것 같습니다.
위에 말씀처럼 Primer의 농도때문일수도 있고
Mixture volume에 따라 장비에서 읽는 형광 값에 차이가 날 수 있습니다. 이에 따른 Threshold에 의해 Ct차이가 발생했을 수도 있습니다. 또한 Total volume외 mixture부족으로 인한 Probe 양 차이로 인한 형광 차이로 같은 문제가 발생했을 가능성도 있습니다. Pleats toe도 확인해보세요.
