cloning실험중인 학생입니다. 

항상 mini prep을 하면 dna 흡광도가 0.1 수준으로 30마이크로리터 정도 얻고있습니다. 

증류수와 VECTOR DNA 2μl씩 SPECTROMETER에 떨어뜨리고 측정하면 DNA 흡광도가 0.1~0.2정도입니다. 

이제 dna 양을 계산해보면 대략 0.1x50해서 5μg/ml가 나옵니다. miniprep 할때 elution은 증류수로 30 μl

떨어뜨렸습니다. 

근데 현재 사용하는 제한효소는 Nde1과 Hind3인데 홈페이지를 보면 1μg이 적정량이라고 나와있어서 VECTOR DNA를 얼마나 사용해야할까요,,  제한효소 처리를 하면 밴드가 안보여서 

농도를 높여야겠는건 알겠는데 MINI PREP을 하면 DNA양이 너무 적어서 고민입니다.,, 

질문: 어떻게 하면 10μL 안의 DNA 양을 1 μg 까지 늘릴수있을까요??????

프로토콜은 이렇습니다

Vector DNA : 1 μg ( ≈ to 10 μL)  그동안 밴드가 안보였던 이유가 DNA양이 기준보다 적어서였던것같습니다. 

10X NEBuffer 2.1 : 2 μL

Nde I : 1 μL (20 units)

Hind III : 1 μL (20 units)

D.W :  to 20 μL // Total 20 μL

Temperature : 37 ℃, Time : 1 hr ~ 2 hr

 #분자생물학   #cloning