일본 약전(2018)에 따르면 정제 스테비아 추출물의 정량화는 Aminopropyl silylated silica gel(아미노프로필 실리실화 실리카겔)이 충진된 컬럼으로 분석을 해야 하며, Stevioside(스테비오사이드)의 체류 시간이 10분 내외로 되도록 유량을 설정하고 다음과 같은 요건을 충족해야 합니다.

<시스템 적합성 요구사항>

1. 용출 순서는 rubusoside, dulcoside A, stevioside, rebaudioside C, and rebaudioside A 이 되야 한다

2. Stevioside와 Rebaudioside C의 분리도는 1.5 이상

3. 스탠다드의 상대 표준 편차 (RSD)는 1.5% 이하

Shodex 에서는 아미노기가 수식된 HILICpak VG-50 4E 컬럼을 사용하여 분석으 진행,  위와 같은 요구사항이 충족되었음을 확인하였습니다.

Standard solution
Sample: 20 µL
1. Rubusoside  0.003 %
2. Dulcoside A  0.003 %
3. Stevioside  0.01 %
4. Rebaudioside C  0.003 %
5. Rebaudioside A  0.005 %

Stevioside standard solution
Sample: 20 µL
3. Stevioside  0.05 %

Column       : Shodex HILICpak VG-50 4E (4.6 mm I.D. x 250 mm)
Eluent       : H2O/CH3CN=20/80
Flow rate    : 0.65 mL/min
Detector     : UV (213 nm)
Column temp. : 35 °C

HILICpak VG-50 4E는 위와 같은 시스템 적합성 요구사항을 충족하였음을 확인하였으며, 정제 스테비아 추출물의 정량화에 적합합니다.

일반 실리카 컬럼 대비 HILICpak VG-50 4E 는 두가지의 특장점을 가지고 있습니다.

1. 일반 실리카 아미노 컬럼 대비 이동상 소비량을 절반 수준으로 감소

2. 일반 실리카 아미노 컬럼 대비 더 높은 수명(Polymer base gel)

<HILICpak VG-50 4E Column Spec Sheet>