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<급> direct ELISA 처음 하는데요...질문~ |
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direct ELISA | 2007.03.20
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| DIRECT ELISA 는 처음이라...몇가지 여쭤봅니다~
검색해보니 아래와 같은 포로토콜이 일반적이던데요...
1. Dilute the antigen to a final concentration of 20 μg/ml in PBS. Coat the wells of a PVC microtiter plate with the antigen by pipeting 50 μl of the antigen dilution per well.
2.
3.
...
뒷부분은 다 알겠는데 1번이 이해가 잘 안되네요.
antigen 이라는 것은 보고자 하는 protein 이 들어있는 sample 을 말하는 것 맞나요?
그렇다면 그 soup 안에 들어있는 protein 양을 20 ug/ml 로 맞추란 소린지...
양을 어떻게 맞추죠???
그리고 여기서 말하는 PBS 는 coating buffer 같은데...
coating buffer 와 sample 을 같이 넣으면 sample 내 protein 이
plate 에 고정되는 원리인가요?
그리고 준비물로는..
plate, 버퍼 제외하고 필요한 시약중엔 direct EZLISA 용 Ab ,
substrate solution 만 준비하면 되는거 맞나요?
이때 HRP secondary reagent 는 필요없는건가요?
참고로, direct ELISA Ab 정보에 " This antibody can be used at 0.5-1 ug/ml
with the appropriate secondary reagents to detect human X(protein).
라고 적혀있는데 여기서 말하는 적당한 2nd reagent 라는 것이 HRP 를 말하는
것인지 SUBSTRATE SOL. 을 말하는것인지 모르겠네요.
모르는게 많아서....부탁드립니다...^^
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#direct ELISA |
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