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질문 Real-time PCR 실험 process를 짜봤는데 많이 이상한가요
개구리Crucial(대학생)  |  2022.09.30

Cell에서 RNA 추출 후 cDNA합성하여 template로 사용하려고 합니다.

Housekeeping gene으로 GAPDH를 사용하고 샘플들 간의 gene A(예시)

발현량 차이를 Real time PCR로 비교하려고 합니다.

먼저 GAPDH와 gene A의 STD curve를 그려서 R^2=0.99 이상에서 

Eff%가 90~110% 안으로 들어오는지 확인합니다.

그리고 Melt Curve에서 sharp하게 하나의 peak만 뜨면 일단 primer에는

문제가 없다고 보고, 

샘플들 간의 gene A 발현량 비교를 위한 본 실험에 들어가려고 합니다.

교수님께서는 굳이 STD curve 그리지 말고 그냥 바로 본 실험 하라고

하시는데, primer 디자인이나 STD의 dilution factor 등 다른 요인은 빼고

위 과정 자체만 봤을 때 이상하거나 부족한 부분이 있을까요?

#Real-Time
#PCR
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