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| Q. CRISPR-Cas9을 이용한 실험해보신 분께 조언을 구합니다. |
| 안녕하세요.
CRISPR-Cas9 경험이 있으신 분께 몇가지 여쭙고자 글을 남깁니다.
현재, 저희 실험실에서 CRISPR-Cas9과 Homology-Directed Repair (HDR) pathway를 이용한 SNVs의 functional study를 계획중입니다.
https://www.nature ... |
| A. HAP1 cell은 1개의 염색체만 가지고 있습니다. 일반적인 cell에 CRISPR/Cas9을 사용할 경우 결국 Wildtype, Hetero, Homo의 3종류의 type이 나오고, 이들의 phenotype은 다양하게 나올겁니다. 이와 비교하였을 때, Haploid ... |
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답변 1 | 2021.06.22 |
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| Q. CRISPR/CAS9 vector 관련 질문입니다! |
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<참고논문>
Multiplex genome engineering in human cells using all-in-one CRISPR/Cas9 vector system
Fusion of catalytically inactive Cas9 to FokI nuclease improves the specificity of genome ... |
| A. pX330A_Fok1 vector와 pX330S-2 vector는 모두 그림 가장 아래에 있는 "Fok1-dCas9 단백질 및 2~7개의 gRNA에 대한 서열을 모두 가지고 있는 vector"를 만들기 위한 재료들입니다.
Restriction enzyme에 의하 cleavage가 일어나 ... |
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답변 4 | 2021.07.12 |
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| Q. crispr cas9 plasmid 관련 문의 |
| 안녕하세요 현재 crispr cas9 system을 도입하려고 합니다.
특정 receptor를 knock-out시키는 목적이구요
protocol setting 중입니다. 맞는지 알려주세요! 이제 공부를 시작한 학생이라 내용에 대한 이해도가 완벽하 ... |
| A. 실험 목적이 정확히 무엇인지 모르겠습니다. 단순히 In/del을 유도하고 싶으신거라면 한개의 sgRNA만 넣어 frame shift로 KO시켜도 무리는 없을 것이고 아예 그 지역을 통째로deletion 시키고 싶으신거라면 제 ... |
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답변 1 | 2020.01.20 |
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| Q. CRISPR/Cas9 system_Knocked out cell line에서의 Negative contorl을 만들고 싶은데.... |
| 끼치지 않는 것입니다.
Q1. 혹시 Santa Cruz에서 판매되고 있는 CRISPR/Cas9 system을 이용하여 negative control을 만드신 분이 있으신가요? 만드셨다면, 어떻게 만드셨는지 궁금합니다.
Q2. Santa cruz system이 ... |
| A. 보통 킷으로 주문하면 negative control용 plasmid가 따로 오지 않나싶습니다만... 혹시 도움에 될까하여 링크 올려드립니다. https://www.scbt.com/scbt/product/control-crispr-cas9-plasmid |
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답변 3 | 2017.02.03 |
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| Q. CRISPR/Cas9 system을 도입하려고 합니다. |
| 그대로입니다..
CRISPR/Cas9 system을 도입하고자 하는데.. 공부를 해도 잘 이해가 안되서 문의드려봅니다.
간단히 하나의 target gene을 knock-down하고자 하는데
적절한 gRNA를 찾아서 올리고 합성하고 Cas9 ... |
| A. 반갑습니다
크리스퍼 셉업단계 랩입니다.
PX335같은 vector에 짠 sgRNA를 ligation 하는데요.
knock out 을 만드실거면 nickase로 하실건지 one-cut으로 하실건지요.
CRISPR tool 구글에 치면 나와요 one-cut으로 하실거면 ... |
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답변 3 | 2014.06.17 |
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| Q. 특정 유전자를 CRISPR/CAS9 knockout 시 에도 protein (단백질) 이 발현 하는 원인은 무었인가요? |
| 학생입니다.
human embryonic stem cell에서 특정 유전자를 CRISPR/CAS9으로 knockout 실험을 진행 중에 있습니다.
genomic DNA를 통해 PCR, T7E1, sequencing 으로 knockout을 확인 하였고 qPCR을 통해 감소된 발현도 ... |
| A. 단백질이 나오고 있다면 유전자가 제대로 발현되고 있는 거겠죠.
그 단백질 확인을 어떻게 했는지에 따라 다른 가설을 세울 수 있을 겁니다.
antibody를 사용했다면 붙는 부위가 어딘가에 따라서 결론 ... |
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답변 3 | 2019.05.02 |
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| Q. lipofectamine이용해서 crispr/cas9 transfection |
| HC11셀에 CRISPR/Cas9 plasmid와 sgRNA를 transfection 하려고 합니다.
lipofectamine사용하는데 초보 대학원생이라 방법을 몰라요ㅠ 설명해주실 수 있을까요?ㅠㅠㅠ |
| A. 함께 안내해 드립니다.
현재 Thermofisher에서 진행하고 있는 CRISPR/Cas9 행사 브로셔도 함께 첨부하여 드립니다.
보다 자세한 상담을 원하시면 injung.kim@thermofisher.com 으로 문의주시기 바랍니다. 감사합니다 ... |
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답변 1 | 2019.01.11 |
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| Q. bacteria에서 CRISPR-Cas9 준비과정이 궁금합니다. |
| KEIO 방법으로 bacteria의 gene knock-out은 많이 해봤으나 CRISPR-Cas9 방법을 쓰려 하니 많이 헷갈립니다. CRISPR-Cas9 을 처음 시도하는 터라 어려움이 많습니다. 간단한 도움이라도 좋으니 고수님들의 코멘트 부 ... |
| A. 안녕하세요, 저도 똑같은 어려움을 가지고 실험에 임했었습니다.
먼저 박테리아의 strain이 무엇인지 명확히 해야합니다.
저같은 경우, Ecoli에서 하였는데요, CRISPR는 절단 기능만 있고 DNA를 붙이는 기능 ... |
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답변 2 | 2018.03.09 |
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| Q. CRISPR-CAS9을 아무데나 적용가능한건가요? |
| 안녕하십니까 Bacteria쪽 실험하는 학생입니다.
제가 이번에 bacteria 하나를 NGS로 전체 genome을 분석해 이 박테리아의 floc 형성에 중요한 영향을 미치는 유전자, 단백질을 찾고 실제로 이 역할을 하는지 알 ... |
| A. 안녕하세요. 써모피셔 싸이언티픽 장윤희 입니다.
질문 주신 내용에 대한 답변 드립니다.
1. cas9이 대부분의 박테리아에 적용이 가능한가요? 범위가 한정되어있다면 그 범위를 알고싶습니다. : 어떤 박 ... |
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답변 1 | 2019.04.11 |
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| Q. CRISPR / Cas9 관련 질문입니다. (이런 gene도 CRISPR system을 사용하는 지...) |
| 안녕하세요
이번에 CRISPR cas9 system을 이용해서 knock down을 진행해볼 예정입니다.
그런데 제가 target으로 하는 gene이 알고보니 Exon이 하나로 이루어져 있습니다.
그래서 이런 유전자의 경우, cas9 system을 이 ... |
| A. Multi-exon이나 single-exon이나 별 차이 없습니다. 어차피 frameshift가 일어나 제대로 knockout된 clone을 screen해야 하는 것은 마찬가지입니다. |
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답변 3 | 2017.08.16 |
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