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| Q. ICC 확인실패> 샘플을 살려서 다시 염색할 수 있나요?? |
| 안녕하세요 ICC를 혼자서 처음 수행해봤는데,
제가 2nd antibody를 잘못붙여서 염색이 되지 않았습니다.
다른 스텝에 전혀 문제가 없을 경우에 이미 DAPI 처리한 sample을
다시 살려서 볼 수는 없을까요?
마치 ... |
| A. 그렇군요 답변감사합니다. |
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답변 2 | 2013.04.28 |
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| Q. Double ICC 해야되는데, 1차항체 종이 같은 경우? |
| kit 를 사서, alexa 시리즈 형광을 직접 1차 항체에 labeling 시킨 뒤, ICC 하면 될것같긴 한데, 실제로 써서 DATA 잘 나온 적 있으신분 혹시 계시면 조언 좀 부탁드립니다.^ ... |
| A. 질문의 요지가..
Double staining 을 해야 하는데 보유하고 있는 2종류의 1차 항체가 같은 종이어서 그중 하나를 labeling 한 후 보시겠다는 것이겠지요?
일단 labeling 의 경우는..저는 아머샴 제품을 사용해본 ... |
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답변 4 | 2010.02.24 |
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| Q. ICC 할때 Blocking solution |
| ICC 할때 보통 2차항체에 의한 non-specific반응을 예방하기 위해서
동종의 serum으로 blocking solution을 만드는 것으로 알고 있습니다
예를들어 10% Normal horse serum. 0.1% BSA가 PBS에 들어가게 해서요..
2차 항체를 ... |
| A. 따라 사용해야 한다는건 잘 모르겠네요.
제가 알기론
보통 ICC 에는 단일 단백질 성분으로 BLOCKING을 합니다. (BSA 등)
종에 따라서 NON-SPECIFIC SIGNAL 을 줄여주는 것이 아니라
단백질 SOLUTION 을 ... |
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답변 1 | 2010.02.24 |
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| Q. ICC antibody 맞는지 확인 부탁드려요ㅠㅠ |
| 제가 이번에 ICC로 BrdU 라벨링을 하려고 하는데요 잘 안되서요..
혹시 안티바디가 맞지않을수도 있다는 ... 솔션은 10% normal goat serum 제품번호 SC-2043 사용했구요.
ICC 고수님들 한번만 부탁드려요.. ㅠ ... |
| A. 올려주신 안티바디 정보로 봐서는 딱히 문제될 게 없어보입니다만..
염색하시는 과정에서 permeabilization 스텝이랑 PBS/T 사용을 안하셨다면
다시 해보시는 것도 좋을 듯 합니다^^ |
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답변 1 | 2013.08.22 |
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| Q. ICC 할때 washing |
| 처음으로 ICC를 하려고 합니다.
Ab 처리하거나 DAPI staining하고나서
washing을 해주는데 이때 흔들면서 wahing을 해주어야 하나요?
혹시 cell이 떨어지거나 하지는 않을지...... |
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답변 0 | 2008.02.28 |
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| Q. immunocytochemistry 할때 primary Ab 처리 시간.. |
| 두가지 Ab를 이용해서 ICC를 해야하는데요,
먼저 1번 Ab를 RT에서 2시간 처리를 하고, 2번 Ab를 4''C에서 overnight했거든요.
근데 이렇게 말고, 두가지 Ab 모두 4''C O/N해도 될까요?
그러니까, 오늘 1번 Ab넣고 O ... |
| A. 가능합니다.
그러나 전 보통 RT에서 각각 1시간씩 처리해줍니다. |
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답변 3 | 2008.07.28 |
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| Q. immunocytochemistry 질문입니다. |
| 안녕하십니까
ICC를 계속 시도하고 있지만 딱히 이렇다할만한 결과를 얻지 못해 글을 올립니다.
8well chamber slide 는 Nunc. Lab-Tek 제품을 쓰고 있구요
이 제품의 slide는 glass-Permanox로 되어있다고 합니다. ... |
| A. 그것을 떠라 seeding량 자체가 너무 작은것 같네요~
한번 ICC를 하시기전에 위상차현미경으로 슬라이드를 한번 보세요~
얼마나 CELL들이 바작에 붙어있는지~
이렇게 봤을때 cell이 많다면 다른 문제이고 ... |
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답변 3 | 2008.08.23 |
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| Q. 급)Immunostaining- 각기다른 시간의 약물 샘플? |
| icc에서 약물처리 시간이 각기 다른데요. 4, 8, 12, 24시간입니다.
약처리후 고정하여서, 최종 샘플 고정후 그 사이샘플을 pbs에 놓고 마지막
샘플 프랩후 한꺼번에 염색해도 되나요?
이론적으로는 가능할것 ... |
| A. 약물처리를 프랩하기
맨처음 24hr 약물처리하시구요..
나머지는 그냥 media에..
그리고나서 12hr 처리..
그다음 8hr처리...
마지막에 4hr처리하시고
한꺼번에 다 같이 프랩하는 거에요..
약물처리는 그렇게 ... |
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답변 3 | 2008.10.21 |
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| Q. coverslip mounting~! |
| 안녕하세요. ICC 하면서 coverslip에 세포를 키우고 있는데요...
mounting이 잘 안됩니다 ㅠ
쓰는건 dako 꺼 쓰구요, vector 에서 나온 안티 블리칭 되는 것도 있는데 이건 잘 안 말라서
핸들링하기 더 힘든 것 ... |
| A. 말리지 말고 해보세요. Washing을 PBS 같은 buffer로 하기때문에 말리면 buffer의 salt가 뿌옇게 침착됩니다. |
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답변 3 | 2010.06.03 |
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| Q. ICC에 관한 질문입니다 |
| ab를 사용할 예정인데,
두 종류의 1st ab가 같은 host일 경우 ICC가 불가능 한가요?
먼저, 첫번째 ab를 붙이고 나서 두번째 ab를 붙이려고 하였으나 생각해보니
형광이 표지된 2nd ab를 붙이면 같은 색깔로밖에 ... |
| A. 1. 안된다는 소리는 아니고, 자기네들이 별도로 확인하지 않아 확신할 수는 없는 경우가 태반입니다.
해봐서 되는 경우도, 안되는 경우도 있습니다. 하지만 했다가 안되는 경우 시간과 재료, 번거로움 ... |
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답변 6 | 2017.04.03 |
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