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실험Q&A    55건 정확도순 날짜순
Q. Yeast Lysis
추출하려고 합니다. 그런데, protocol에서 Lyticase나 Zymolase가 Lysis를 위해 필요하다고 하는데 저희 실험실에는 없어서요ㅠㅠ 혹시 대체 할 수 있는게 있을까요? 논문을 찾다보니 Lysozyme에 다른 계면활성제 ...
A.  - yeast cell wall은 Lyticase or Zymolase가 필요합니다. - lysozyme : bacteria peptidoglycan lysis - Tween, SDS : cell membrane lysis
답변 2  |  2022.09.14
Q. yeast의 cell lysis
있습니다. 균주들을 선택해서 발효도 진행중인데 좀처럼 cell lysis를 어떻게 해야되는지를 모르겠네요 bacteria는 boiling만 해도 쉽게 되는데 몇몇 방법을 써봤지만 전혀... 보통 어떤 방법들을 통상적으로 ...
A.  주로 sonication을 이용합니다만, 단순히 전기영동할 목적이라면 sample buffer에 넣고 끓이는 것만으로도 cell은 다 깨집니다. SDS가 들어가 있고 100C에서 끓이는 조건에서 깨지지 않는 미생물은 없습니다.
답변 2  |  2012.11.29
Q. Freeze Thaw Vs Glass Beads (Yeast cell lysis)  |  첨부파일 첨부파일
두가지방법으로 yeast cell lysis를 진행시키고 모은 protein들을 샘플로, SDS-PAGE gel 을 이용하여 eletrophoresis 를 진행하였습니다. (왼쪽sample:freeze thaw 가운데: STANDARD 오른쪾샘플: glass beads) 질문 1) Freeze Thaw Vs ...
A.  별개 아닌가요? DNA prep. 방법이라면 예전에 저는 lysis buffer (아마 소량의 SDS가 포함됐던 걸로 ... 물론 phenol extraction으로 정제 했었구요. 동량의 yeast cell을 썼다고 해도 뽑힐 수 있는 DNA양은 다를 수 ...
답변 2  |  2013.11.28
Q. DNA isolation from Yeast  |  첨부파일 첨부파일
것입니다. Yeast> 1. 1.5ml micro tube에 1.5ml 씩 분주. 2 ... 의해 pellet을 suspension. 4. Yeast lysis solution 200ul 첨가. 5. phenol/chloroform/Isoacyl alcohol(25:24:1) 200ul과 acid washed glass bead 0.25~0.3g 첨가. 6. 2min 동안 ...
A.  혹시 elution 뭘로 하셨나요? RNA 일 수도 있을꺼 같은데요, 없애려면 elution buffer에 RNase를 첨가해주면되는데.. 그리고 위대로 prep.하면 genomic DNA랑 plasmid랑 같이 나오는건 알고 계시죠?
답변 1  |  2011.02.23
Q. Yeast colony PCR 질문입니다.
이스트는 손에 잘 안익네요 혹시 sonication 등으로 lysis시킨뒤 PCR 하면 잘 안될까요? 단순히 벡터 ... transformant가 많아 손대질 못하고 있습니다. 혹시 Yeast colony PCR 이 확실히 잘 되는 방법 알 수 있을까요 ...
A.  저도 고생하다가 조건을 잡아서 잘나온 protocol 인데 boiling 만으로는 결과가 재현이 안되더라구요 pellet(약 400 ul midia, spin down) 을 0.02 M NaOH 100 ul에 vortexing 하여 부유 시킨후 90 도, 10 분간 boiling , 상온에 ...
답변 2  |  2009.11.10
Q. yeast total protein extraction에 대해서 질문이여.
1. yeast total protein lysis buffer 조성을 좀 알 수 있을까요?? 2. 전체적인 실험과정을 알려주세요 ㅎ
답변 0  |  2011.01.25
Q. 스피드님! yeast gDNA만을 transformation 한것은 아닙니다.
yeast gDNA만을 transformation 한것은 아닙니다. yeast에서는 plasmid prep.이 잘 안되서 전체 DNA를 분리한 후(lysis buffer+bead로 DNA를 분리하면 shuttle vector가 포함되어 있겠지요.) E.coli에 transformation 한다고 ...
A.   일반적인 plasmid prep. 과정과 동일하게 하면되고 cell lysis과정에서 lyticase나 zymorase를 사용하여 cell wall을 파쇄하여 사용하시면 됩니다 ...
답변 3  |  2009.01.16
Q. yeast cell lysis
yeast cell을 이용하여 recombinant protein을 발현시킨 후 homogenizer을 이용해 lysis을 했습니다. 문제는 lysis후 centrifugation을 하면 cell debris와 분리가 안된다는 점입니다.(20000g, 1h) 특이한 점은 cell lysis 용액을 그 ...
답변 0  |  2013.12.11
Q. lysis of yeast cell walls 에 관한 질문요..
yeast가지고 하는 실험이 처음이라서 그러는데.. enzyme 가지고 말고 chemical 한 방법없을까요?? solution을 써서 한다든지요..
A.  glass beads넣고 깨는게 가장 저렴하죠 :)
답변 1  |  2011.04.27
Q. triton x-100이 하는 역할이 뭔가요??
yeast lysis buffer에 triton x-100 이 들어가는데 이게 하는 역할이 뭔가요??? 그리고 yeast total protein extraction하는 protocol좀 알려주세여!!!!
A.  저것 이외에도 여러가지 가 있지만... 가장 쉽게 생각할 것은 밥먹고 식기 닦을때 퐁퐁이를 왜 쓰는지와 세포의 구조, 특히 막의 구조를 알면 쉽게 이해가 될듯 두번째는 포탈에서 찾으면 주르륵...
답변 1  |  2011.01.31
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