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| ⓘ 'Cloning' 관련 검색광고입니다. |
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DNA Substrate Type에 따른 NEB 사의 ligase 제품을 써보시고 Cloning 효율을 높여 보세요!! |
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| 7,360건 |
정확도순 ㅣ 날짜순
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| Q. cloning할 때 insert크기 문제 |
| 있는 것을 제한효소 Nde1, Xho1으로 처리하고 다시 pET vector에 cloning하는 데 실험이 안되네요
이와 비슷한 크기의 insert를 가지고 실험하여 성공하신 분의 의견을 듣고 ... |
| A. 또는 어떤 크기의 DNA를 사용하고 있느냐에 따라 cloning방법에 있어서 차이를 보이는 것은 아닙니다. DNA정제시스템은 물론 사용하고 계신 enzyme들, 그리고 competent cell에 이르기 까지 모든 것이 완벽해야만 ... |
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답변 4 | 2009.04.08 |
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Q. t-vector cloning |  첨부파일 |
| 관계로 commercial한 T-vector를 무한정 쓸 수 없어서,
T-vector를 cloning해서 쓰고 싶은데요.
찾아봤더니 enzyme처리와 primer를 다시 짜야 한다고 나오더라구요.
1. enzyme : 어떻게 선택해야하는지..
2. primer design : ... |
| A. 갖고 계신 TA vector를 이용한 실험에서 Blue colony중 한두개를 얻어 Plasmid를 뽑은 후 EcoRV를 사용하여 잘리는지를 먼저 확인해 보세요.
EcoRV에 의해 잘린다면 이는 T가 없는 EcoRV의 self ligate입니다. 이를 확 ... |
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답변 4 | 2009.04.28 |
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| Q. cloning(electorporation 시 vector 얼마나 쓰시나요? |
| 생성되지 않아서 무슨 문제가 있는 건지 잘 모르겠습니다.
cloning에 대해 잘 아시는 분들, 실험하고 계신 분들
vector 얼마정도 넣어서 실험하시나요 ... |
| A. 사용합니다. 이는 library를 만들기 위한 목적이며 단순히 cloning용으로는 electrotransformation방법을 사용하지 않습니다. 일반적인 chemical com cell을 사용해도 소기의 목적을 달성할 수 있는 충분한 수의 ... |
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답변 1 | 2013.03.28 |
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| Q. cloning이 잘 안됩니다 |
| 있는 plasmid에 약 2kb가량의 gene을
cloning하려고 합니다.
저의 cloning은 이렇습니다.
- primer 설계시 제한효소 앞 염기 4개를 추가하여 제한효소처리의 효율 증가
- Taq polymerase 사용 (promega)
- 제한효소 처리 ... |
| A.
"colony수가 아주 많다."
조금은 주관적인 표현인 듯 합니다.
Cloning에서 가장 중요한 요인중 하나가 competent cell의 효율입니다.
가능한 10^7 /ug DNA 이상의 효율을 갖는 competent cell을 사용하는 것이 좋으며 ... |
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답변 1 | 2015.06.18 |
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| Q. cloning primer |
| cloning을 하기위해서 primer를 디자인하고 있는데, forward에는 BamHI을..
reverse에는 NcoI site를 첨가하려고 합니다.
그런데 단순히 제한효소 부위만 더 넣어준다고 되는것이 아니고 1-3개의 염기를
추가하여 ... |
| A. 그렇게 하는것도 가능하긴한데 그것도 효과적인방법이라고 보긴 힘드네요..
제일좋은방법은 subcloning하는게 좋은데 보통 TA-Cloning을 먼저 해서 자르는것이 효율이 좋습니다 |
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답변 2 | 2007.04.03 |
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| Q. cloning이 몇달째 안됩니다. 도와주세요. |
| kit를 사용해보기도 했습니다.
하지만 매번 뻥벡터(아무 cloning안한 벡터)와 반응시킨 competent cell에서만 콜로니가 뜨고 나머지는 뜨지가 않더라구요.
이제는 뭘 건드려야할 지 모르겠습니다.
digestion한 ... |
| A. cloning이란 참 쉬우면서도 어렵죠
써주신 대략의 protocol을 보면 틀린 부분은 없습니다. 하지만 이 과정만보곤 무엇이 잘 못 되었는지 알지 못합니다.
한가지 말씀을 드리자면 empty vector가 생긴다는 것은 ... |
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답변 9 | 2014.08.13 |
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| Q. Cloning ... |
| 된 size에 뜬 것 포함해서 band가 너무 많이 떴습니다...
cloning이 어디서 잘 못 된 것인지.. 알 수 없네요...
선배님들 답변 부탁드립니다! ... |
| A. white colony라고 해서 target insert가 들어갔다는 보장은 없는데 얼마나 picking하셧는지?
잡 band가 많이 떳다는건 transformation과정에서 뭔가 잘못 됏을 가능성을 제기함니다 |
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답변 4 | 2013.08.08 |
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| Q. cloning 질문 |
| -->TF--> prep후 젤내려서
cloning 된것을 찾았죠
그후에 정말 cloning이 된것인지 확인하기 위하여
(bgl2-hind3, EcoRI single cut, xho1-not1 cut) 했죠
이것은 insert 내의 enzyme과 vector의 enzyme을 따져서 이렇게 잘랐죠 ... |
| A. 1. 그 다른 enzyme들, active한 거죠? control로 확인했나요?
2. TF 후 colony 몇 개나 찍어보셨나요? 이삼십개 ... 더 권장.
3. 프랩한 DNA 에 문제가 있을 수도 있습니다. 원 모어 타임.
"Cloning에는 왕도가 없다. ... |
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답변 3 | 2007.02.16 |
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| Q. cloning 후 enzyme cut이 되지 않습니다. |
| 친구는 sequencing을 해봐야한다
의견이 갈립니다.
보통 잘 cloning이 진행되었는데 이런 현상이 발생하는지 궁금하여 질문 드립니다 ... |
| A. 정보가 부족해서 뭐가 문제인지 잘 모르겠네요.
혹시 INSERT 크기가 너무 짧아서, 안보이는 것은 아닐까요? 짧아서 GEL을 빠져나간다는 것도 문제지만, 짧으면 그만큼 EtBr이 덜 달라붙기 때문에, band ... |
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답변 1 | 2016.08.18 |
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