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실험Q&A    39건 정확도순 날짜순
Q. imidazol 농도 질문
Imidazol은 햇빛에 민감하다고 필요시에 만들어쓴다고해서 10ml 제조 질문입니다 1.20mM tris. (Stock1M) 2.200mM NaCl. ( stock 5M) 3.300mM imidazol. (stock1M) A :1,2,3 모두 넣어 만든 10ml제조시 각 200ul, 400ul, 3ml, 물6.6ml.) ...
A.  - A, B는 다릅니다.
답변 4  |  2022.10.29
Q. his-tag column으로 정제한 단백질 imidazol 제거에 관하여
tag column으로 정제한 단백질을 imidazol을 제거하기(농축) 위하여 centricon(centrifugal filter devices)을 이용했는데(시간이 좀 걸려요.하루정도) 최종 획득한 단백질 농도가 너무 낮아요.단백질 농도를 높이는 ...
A.  처음 정제한 단백질은 많았는데 최종 얻은 단백질의 양이 많이 적어졌다는 말씀이신지요? Centricon은 mol cut방식이기는 하지만 단백질이 크더라도 구조에 따라 membrane을 통과하기도 하여 centricon만으로 ...
답변 1  |  2006.06.27
Q. Ni-NTA 컬럼을 이용한 단백질 결합에 관한 문제
5mM lysis buff로 내렸을때 희미한 band만 나올뿐 높아진 imidazol 농도에는 band가 나오지 않네요... 모두 unbind에서 나와버리고.... 혹시 저와 같은 경우를 경헙하셨거나 해결책을 아시는 분이면 조언을 ...
A.  후에 다시 내려 보았는데 binding을 하였습니다. ^^ 하지만 imidazol 30mM에서 다 떨어져 버리네요~~ 다행인건 다른 밴드가 없어서 분리는 하였지만 낮은 농도에서 떨어지는 것이 좀 찝찝하네요~~~ his tag ...
답변 5  |  2010.02.02
Q. His tag protein purification 에 대한 질문입니다.
이 안됩니다. 5) affinity 가 약할 지도 몰라서 binding buffer 에 imidazol 이 없는 것으로도 해보았습니다. 6) Ni-NTA column 의 문제일지 몰라서 다른 랩에서 빌려와서 (그랩에서 잘 쓰고 있는 것으로qiagen과 GE) 꺼 ...
A.  나름 다양한 test흘 해보신듯 해서...답변이 도움이 될런지 모르겠습니다. 1. binding이 안된다는 것이 가장 큰 문제인듯 한데요... (더 이상한건 왠만해선 denature 조건에서 조차 안 붙을수가 없죠!!) 그리 ...
답변 5  |  2011.01.19
Q. inclusion body solublization에 대해서요..
달리(pH 8, 6.3, 4.5)해서 사용하는 방법이랑 pH는 동일(pH8)한데 imidazol 농도를 1mM하고 250mM로 달리 사용하는 방법 두가지가 있던데.. 어떻게 다른 건가요 ...
답변 0  |  2010.09.03
Q. E.coli에서 protein overexpression 과 purification의 문제
너무 많이 존재해서 문제가 됩니다. 정제시 wash buffer의 imidazol 농도도 조절해보고, resin과 binding 시간 등도 변화를 줘봤으나 별다른 차이는 없습니다. 그리고 발현시킨 단백질 중의 하나는 Antibody를 만들 ...
A.   저는 님께서 해결책으로 해보신 정제시 wash buffer의 imidazol 농도의 변화를 통해 조건을 잡아서 해결을 보았습니다. 그리고 저역시 과발현이 목적이었는데 이놈의 것은 SD와 ATG의 거리부터 시작해서 ...
답변 4  |  2006.11.03
Q. 단백질 추출 니켈컬럼(Ni column)에 관한 질문입니다.
(5mM) 50ml x3, washing buffer (50mM)50ml x3, elution buffer (400mM) x1 →imidazol로 buffer 농도 맞춘다. 1) Binding X 3(sup 섞어서) → Washing X 3 → Elusion ...
A.  히스택은 보통 N-terminal에 붙이지요. 그런데 경우에 따라서는, 단백질에 따라서 종종 이 히스택이 단백질 구조속으로 접혀들어가는게 아닌가 싶어요. 그래서 c-terminal에 히스택을 붙여서 해결하곤 합니다.
답변 4  |  2013.04.01
Q. his tag관련 정제에 대한 질문입니다. 고수님들 도와주세요.
2차정제를 하고싶은데.... elution한 샘플을 합치면 평균 imidazol의 농도가 225mM이 되는데 NI-NTA 레진에 다시 내릴때 한 10mM정도로 dilution해서 정제를 해야하는지 아님, dyalisis를 해서 해야하는지 ...
A.  보통 step gradient elution을 하는 이유는 impurity가 없는 fraction을 얻기 위함입니다. Gradient elution을 하시고 ... imidazole이 없는 buffer로 희석을 하시건 binding buffer이하로 imidazole의 농도를 줄이셔야 합니다 ...
답변 1  |  2006.03.20
Q. Ni-NTA agarose에 binding 시킨 단백질을 끓여서 떼어낼 수 있나요?
끓여서 바로 SDS-PAGE 걸수 있다면 매우 편리할 것 같습니다. imidazol elution을 해야 한다면 양이 적어서 농축을 해야 찾으려는 단백질이 확인 될 것 같거든요.. 아시는 분 있으시면 알려주세요. ...
A.  SDS buffer로 당연히 떨어집니다. 하지만 해보시면 그냥 bead에 붙는 단백질이 생각보다 훠얼씬 많다는걸 아시게 될 겁니다.. -_-
답변 5  |  2008.03.11
Q. Protein purification
mM, 200mM 300mM 짜리 만드는데 이것들도 dw넣고 만들면 되나요? imidazol 워싱하고 남은버퍼 버리던데 뒀다가 다음에 쓰면 안되나요? 3.Size exclusion할때는 위의 washing buffer를 DEPC water 로 만들던데 특별한 이유 ...
A.  1. 네 2. 네 / 뒀다 써도 되긴하는데 저의 경우에도 stock 만들어놨다가 fresh 하게 섞어서 만들어서 써 버릇하긴 했습니다. 3. 글쎄요? 저는 DEPC 로 해본적이 없습니다. 굳이..?
답변 2  |  2022.10.28
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