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정확도순 ㅣ 날짜순
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| Q. cell에 어떤 gene의 mutation확인 방법! |
| cell내에 genome에서 A라는 gene이 mutaion이 있는지 없는지 보려고
하는데요 어떻게 확인할수 있나요?
제가 찾은 바로는 sequencing밖에 없네요..도와주세요 |
| A. 어느 부위에서 정확히 mutation이 일어났는지 알수 있으시다면.... 예견 가능하시다면....
PCR로 확인 할 수 있지 않을가 생각 드네요 |
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답변 6 | 2012.08.29 |
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| Q. PCR 로 하는 site directed mutagenesis |
| GC content가 높아서 site directed mutagenesis kit을 이용한 point mutation만들기가 계속 안 되고 있습니다.
그래서 PCR로 하는 방법이 있다고 들었는데요..
어떻게 하는건지 혹시 아시는 분들 부탁드려요.. |
| A. primer를 point mutation하고자 하는 부위를 포함해서 만드신후 PCR로 띄우면 되죠.
물론 enzyme site등을 고려하셔서 cloning 전략을 짜시면 되겠네요. |
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답변 3 | 2007.01.25 |
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Q. point mutation primer 짤 때 |  첨부파일 |
| 3개가 다 다른 것으로 짜도 잘 붙나요?
Leu(CTG) -> Tyr(TAC) 로 mutation을 주고 싶을 때,
예를 들면 ACACAGGC CTG GATCTGC -> ACACAGGC TAC GATCTGC
이런식으로 짜도 잘 붙을까요?
보통 한 두개 염기만 다른 것들로만 해봐서 ... |
| A. . mutation primer를 짤 때 염기 3개가 다 다른 것으로 짜도 잘 붙나요?
- 3개 염기를 바꿔도 PCR 가능합니다.
2. Pro(CCT) 을 Gly으로 바꿀 때, gene에서 주로 쓰이는 Gly(GGA) 가 나은 것인지
아니면 Gly(GGT)가 나은 지 ... |
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답변 2 | 2020.01.05 |
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| Q. point mutation 질문입니다. |
| PCR을 통한 point-mutation 진행하고 있습니다.
대략 3kb 정도의 target 유전자의 2267에 위치한 DNA sequence 하나를 변경 ... 공유나 도움 부탁드립니다 ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
혹은 point mutation kit 추천 부탁드립니다 ... |
| A. overlap pcr 한 거죠?
Pfu로 3kb 증폭하기 어렵습니다. 다른 효소 수배해 보세요.
그리고, 1차, 2차 PCR을 Nest로 디자인 하는 것이 좋습니다.
프라이머를 어떻게 짜셨는지요? |
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답변 4 | 2017.01.09 |
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| Q. point mutation 후 스크리닝 관련하여 질문드립니다. |
| mutation 시킬 때에는
유전자 전체를 knockout 시키고, point mutation 시킨 유전자를 다시 knockin 하여 진행하였는데,
이번의 경우는 유전자 상이 아니라 promoter 쪽 부위여서 막 건드릴 수가 없을 것 같습니다 ... |
| A.
- 목적에 따라서는 K/O -> vector expression도 가능할 것 같습니다.
- PCR로 mutation 부위를 포함하는 단편을 증폭 후 염기서열 분석해 보세요 ... |
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답변 1 | 2022.07.25 |
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| Q. null mutation은 어떻게 하나요? |
| 모든 protein에 대한 sequence만 알고 있으면 이에 대한 null mutation 은 가능한지요? 많이 알려진 protein을 가지고서 예를 들어서 설명해주시면 안 될까요?
님의 소중한 comment 기다립니다 ... |
| A. 발현자체를 원천봉쇄하는 방식입니다.
요즘 가장 쉽게 접근할 수 있는 방법은 siRNA를 이용한 translation block일 겁니다.
그외에 knock-out등을 이용해 gene 자체를 없애주는 것도 null mutation의 하나입니다. |
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답변 1 | 2006.05.01 |
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| Q. point mutation 질문입니다. |
| 없으면 제가 mutation시킬 부분을 포함하게 잘라내어서 mutation 후 다시 ligation시키는 방법이 최선일까요?
선배님들의 조언을 부탁드립니다 ... |
| A. 포인트 mutation이시면 프라이머제작해서 할수 있지 않나용? |
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답변 5 | 2012.03.08 |
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| Q. point mutation |
| mutation : Met.............stop.............................stop
두개 모두 mutation을 주면 가장 확실하지만요
단백질이 발현될까요 ... |
| A. 글이 너무 어렵네요...
결국 중간에 stop은 넣었다.
처음에 Met 이 Ser로 변환시켜야 한다.
그럼 앞쪽 primer를 Ser로 변환해서 PCR을 진행하면 되겠네요...
Point Mutation은 Overlapping PCR로 아주 손쉽게 할수 있습니다. |
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답변 3 | 2012.06.28 |
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| Q. tumor mutation에 관한 질문인데요, |
| 실험에 관한 질문은 아닙니다만,
CTC(circulating tumor cell)에 관한 논문을 읽다가요,
약물 민감도 검 ... mutation을 일으키는것처럼 느껴지는데요,,,
종양의 mutation은 어떤 메커니즘으로 일어나는건가요> ... |
| A. 별루없습니다. 저는 어머니를 잃었습니다...
종양의 자발적 mutation 메커니즘으로 전 cell fusion을 신봉합니다 ... |
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답변 1 | 2015.11.23 |
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| Q. cloning한 뒤 많은 mutation이 나타납니다. |
| 이내로입니다.
그리고 cloning할 때 저 말고 다른분이 이렇게 mutation이 많은 분이 있었고 그분이 어떻게 해결을 보았는지의사례를 알 수 있었으면 좋겠습니다.
제가 하도 정신이 없다보니 이상한 글이 ... |
| A. primer를 만들어서 3개로 확인해보세요.
cloning 과정에서 mutation이 일어나는 것은 대부분 DNA polymerase에 의한 pcr 과정에서 일어납니다~~~ ... |
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답변 2 | 2018.03.07 |
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