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Q. subcloning 마지막 확인 단계인 plasmid cutting시 band 양상이 이해되지 않아 질문드립니다. |  첨부파일 |
| linear plasmid, supercoiled plasmid로 나뉜 3개의 band로 나타난 양상과 ... 위의 사진에서 supercoiled plasmid로 하나의 band만 나타난 것이라고 가정했을 때
왜 enzyme으로 cutting했을 때 아래 사진과 같은 양상으로 ... |
| A. cell은 어떤 것을 사용했나요?
위의 gel에서 나온 plasmid는 1개만 제외하고 진한 band가 CCC form으로 본다면
subcloning이 된 위치에 나온 것으로 보입니다 ... |
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답변 1 | 2020.07.24 |
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| Q. band가 왜 3개일까요? (plasmid 확인시) |
| minispin prep을 사용하고 있습니다.
PCDNA/SP1 plasmid를 2개의 제한효소로 자르는 데 이전에는 같은 조건에서 5.4kb와 2.7kb band가 잘 나왔는 데 이번에는 그 사이에 5미만의 band가 하나 더 생깁니다.
부디 ... |
| A. non-cutted plasmid 라고 생각이 되네요.
enzyme 의 활성이 조금 떨어졌거나 아님 ... 않으셨는지 확인 해보세요.
제 생각에는 잘리지 않은 plasmid가 남아서 그렇게 보이는것 같습니다.
plasmid가 liner 보다 빨리 ... |
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답변 3 | 2006.09.14 |
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| Q. plasmid DNA vector 가 2 band 가 뜨면요? | 첨부파일 |
| plasmid DNA vector 를 3M paper 에서 elution 하여서.
transformation ... DNA 가 맞는지...enzyme site 로 cutting 하였는데...
1 band 가 뜰줄 알았는데..2 band 가 뜨고...위치도 달라서...
그냥 뽑은 DNA 를 걸었거든요!! 그럼 분명 ... |
| A. pattern을 보이고 있으며 이건 plasmid를 뽑을때에 CCC와 OC form의 두종류가 나온 겁니다. 대략 예상되는 plasmid의 크기는 7-8kb 정도가 될것으로 ... 너무 많이 걸지 마세요. DNA band가 뭉태기로 나와서 크기 ... |
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답변 1 | 2010.05.13 |
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| Q. plasmid prep 후 농도와 plasmid band 패턴이 관련이 있을까요? |
| 가장 많은 일반적인 plasmid band 패턴이었습니다!
수율이 낮은 것과 plasmid band 패턴이 이상한 것이 관련이 있을까요?
아무리 서치해봐도 속시원한 답이 나오지 않네요,, 혹시 이런 경우가 있었던 분이 ... |
| A. - 농도와 패턴은 상관 관계가 크게 없습니다.
- 농도 : 추출 수율과 관련
- 패턴 : 추출 과정이 smooth 또는 rough한지에 관련 |
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답변 1 | 2022.07.19 |
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| Q. midi prep 후 gel loading 했는데 이상한 band가 있어요 | 첨부파일 |
| 500bp 위치에서 선명한 또다른 band가 보이더라구요
qiagen kit로 ... 봤더니 똑같더라구요.
여튼. plasmid DNA를 prep하고 나서 보관중에 이런 band가 나타나는건 무엇때문인가요>?
혹시 다시 cloning을 해야 되는 ... |
| A. 너무 감사합니다.
이거 때문에 며칠 잠도 설쳤더니.. 이제야 조금 안심이 되네요..
정말 감사합니다. |
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답변 2 | 2011.02.16 |
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| Q. plasmid band 아래에 band가 뜨는게 이게 대체 뭔가요? | 첨부파일 |
| 뒤, white colony를 incubation해서 plasmide extraction을 시행했습니다.
그런데 이 plasmid를 1% agarose gel에 loding 하니 진한 band 아래에 다른 band가 보이네요. 이 band의 정체가 뭔지 모르겠어서 질문 드립니다 ... |
| A. CsCl ultracentrifuge 하면 없어집니다.
그거 denature 된 single strand plasmid 입니다.
Plate 에서 갓 자란 colony 를 키워서 plasmid prep 을 하면 저런 형태가 거의 안보이지만 상태가 좋지 않은 cell에서 prep하면 자주 ... |
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답변 3 | 2021.05.31 |
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| Q. plasmid DNA 전기영동 실험 도와주세요ㅜㅜ | 첨부파일 |
| plasmid DNA 전기영동 실험 관련해서 ... 않은 lane에서는 맨 위쪽 band는 재조합된 plasmid DNA-대략 8kb, 그 아래는 첨가되지 않은 plasmid DNA-대략 5~6kb라고 생각했고요
둘 다 처리한 lane에는 맨 위쪽은 역시 잘리지 ... |
| A.
지금 사진 해상도가 많이 낮고, DNA ladder의 각 band size가 확인이 안 되긴 합니다만,
plasmid DNA를 그냥 달리면 보통 2개 band가 보이는데요,
그건 별로 안 중요합니다.
EcoRI과 XbaI으로 single cut 했을 때,
DNA가 ... |
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답변 3 | 2013.05.17 |
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| Q. plasmid 전기영동에 대해서 궁금해요.. | 첨부파일 |
| 22 plasmid 를 제한효소처리를 하면 정확하게 약 4kb 위치에 band가
나와요...
그런데 plasmid를 제한효소 처리를 안하고 전기영동을 하면 사진과 같이
band가 나와요...
제가 궁금한건 4kb위치한 band가 OC로 판단 ... |
| A. 처리했을때 4kb 위치에 band가 나왔다면
open circular form의 경우 크기때문에 ... 4kb보다 더 작게 나오죠..
10kb이상의 크기는 plasmid prep시에 딸려온 chromosomal DNA의 일부가 아닌가 생각됩니다.^ ... |
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답변 2 | 2006.10.03 |
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| Q. plasmid dna 전기영동 |
| plasmid miniprep 해서 gel 을 걸어보면..
(Tvector, insert ligation 한 plasmid 입니다)
원하는 위치에 band 가 나오는데 위에 규칙성 있는 간격으로 희미하게
세개정도가 더 나오는데요..
사다리처럼..
원하는 진한 band ... |
| A. 맨 밑에 사이즈가 제일 작은 것이 supercoiled plasmid 입니다.
가운데는 nick..
맨 위는 linear..
그리고 supercoiled plasmid가 많을수록 잘뽑은 것(?) 이지만..
3개가 나온다고 해서 실험하는데 지장은 없습니다.. |
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답변 2 | 2009.04.30 |
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| Q. plasmid mini prep band 확인 부탁드려요.. | 첨부파일 |
| LB배지에 cell 외에 찌꺼기가 좀 있는거 빼고는
Protocol 대로 실행했구요
band가 너무 지저분한게 왜일까요;
white colony 로땄습니다. ... |
| A. sol1에 RNase를 첨가하셨나요??
꼭 RNase 컨템처럼 보이네요.. |
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답변 5 | 2009.07.19 |
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