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실험Q&A    18,587건 정확도순 날짜순
Q. protein elution 에 관한 질문 입니다.
non-specific은 있겠지만 나중에 eukaryotic cell에서 발현시킨 protein 확인시 쓰게될 Ab 거든요.. 경험있으신 분들의 조언 부탁드립니다. ㅡㅡ ...
A.  대장균에서 얻은 다소 순도가 좋지않은 단백질로 항체를 만들어, 님이 하실려고 하는대로 동물세포에 대해 사용한다면 경험상, 큰 문제는 없습니다. 다만, 제가 알기로는 항체를 만들 때 100 ug 이상의 ...
답변 4  |  2006.09.27
Q. acidic sample에서의 protein 정량...갈켜주세요~
제가 측정하려는 샘플은 단일 protein을 조직에서 추출한 것입니다. Bradford method로 측정하려니 색 ... 않은것 같구요. 그럼 pH3.0정도 되는 protein sample은 어떤 protein정량법을 써야하나요? 가르쳐주세요 ...
A.  Protein이 어느정도 Pure 하고, amino acid sequence를 알고 있다면, amino acid sequence 로 excintion coefficient를 계산하고, http://us.expasy.org/tools/protparam.html A280 에서 Absorbance를 재서 농도를 계산해 보세요.
답변 3  |  2006.11.08
Q. protein expression 시..
만들때 한쪽에 stop codon을 넣어서 만들었는데.. 혹시, protein purify할때 his tag이 양쪽에 붙어있는거랑은 어떤 큰 차이가 있을까요? ...
A.  종결코든있으면 생산하고자하는 단백질에 his tag 발현안될 가능성이 높아요 발현되도 his taq만 따로 발현될 가능성이 있습니다 그렇게 되면 his taq 정제율이 낮아지겠죠
답변 2  |  2010.08.08
Q. E.coli를 이용한 protein expression
제가 지금 E.coli 를 이용하여 6xHis tag fusion된 protein을 만들려합니다 아직 coloning단계이긴하지만 나중에 protein ... 좋나요 Novagen과 pierce에서 몇몇kit를 보긴했는데 protein purification고수님들 도와주세요 ...
A.  His 정제에 필요한 Ni-IDA-Agarose resin 무상샘플을 (사실은 정제품이지만...) 아직도 원하시는 분들에게 조건없이 무료 배포하고 있습니다. 매뉴얼은 저희 회사 홈피에서 다운받으실 수 있고 또는 다른 회 ...
답변 1  |  2006.04.05
Q. GST fusion protein purification과정 중에 궁금한점이 있습니다.
fusion protein purification 실험(pGEX-4T1-GFP사용)중에 IPTG를 처리하지 않고 sonication하여 얻은 sample을 원심분리(섭씨4도, 12000rpm, 5분간)하여 sup을 따서 sample1을 만들고, pellet에는 다시 NETN버퍼 처리 후 ...
A.  샘플 1은 soluble fraction이고 샘플 2는 0.5% NP40에 의해 녹아나온 insoluble fraction일듯 합니다. 샘플3의 단백질 사이즈는 유전자 정보를 바탕으로 아마노산 서열의 분자량을 프로그램으로 얻어내면 되는데 대 ...
답변 2  |  2014.06.09
Q. Cloning 후 protein의 발현을 확인 하고 있습니다.
확인 해본 결과 mRNA expression은 아주 잘되고 있었습니다. protein만 확인이 안됩니다. ㅠ_ㅠ 발현에 사용된 promotor는 CMV이고, poly(A)는 bGH_poly(A) tail을 사용하는 vector 입니다. 도움 ...
A.  아미노산 30개 사이즈가 너무 작아서 안티바디가 잘 안붙는거 아닌지 생각은 드네요. 발현은 됐을껄로 생각이 드는데.. 안티바디 안쓰는 다른 방법을 고려해 보시는게 좋을것 같네요.
답변 1  |  2015.07.10
Q. protein sample
안녕하세요 protein sample을 약 1달간 -70도가 아닌 -20도에 보관했는데 이럴 경우 단백질들이 다 변성되거나.. 하여간 실험할 수 없게 되나요? 가르쳐 주십시오... 감사합니다.
A.  precipitation 과정을 거쳤다면 괜찬을 듯 싶은데요 하지만 protein 변성되는 경우는 얼었다 녹았다를 반복하는 경우가 제일 심각한 경우입니다. 계속 그 상태로 있엇다면 일반적인 실험하는데는 문제가 ...
답변 3  |  2007.02.20
Q. protein 분리하려 합니다.
샘플속에 있는 특정 protein만 분리하려 합니다. Ficoll이나 Percoll, Sucrose등은 protein 분리에는 무리일까요?
답변 0  |  2007.08.29
Q. 고수님들 도움요청//단백질 분리문제 중 문제발생.
안녕하세요, 저는 E.coli를 이용.target gene을 overexpression시키고있습니다. 6 개월정도 벡터와 호스트를 변경해가면서 insoluble로 발현되는걸 chaperone plasmid와의 coexpression을 통해서 soluble fraction으로 발현하 ...
A.  . 목적단백질의 발현을 anti-His ab나 anti-protein ab로 확인은 하신거지요? 2. N-term His tag이라면 C-term으로 바꾸어 주는 것도 시도해 볼만할 듯 합니다. N-term이 설령 구조적으로 단백질의 내부로 들어갔다해도 ...
답변 5  |  2007.11.22
Q. 어떤 protein의 activity 를 갖는 domain 을 알고 싶은때???
라고 하는 protein을 cloning 해서 만들려고 하는데... activity 를 갖는 특정 domain 만 cloning 해서 만들려고 하는데요... 어느 부분이 중요한지 알기 위해서는 어디가서 알아봐야 하나요.... research 방법만 좀 ...
A.  domain이 가장 중요할것 같구요.. 중간의 signaling 전달해주는 protein이라면 phospho site가 중요한 domain이 되겠죠.. domain의 내용은 NCBI에 나와있으니 size에 대하여는 쉽게... 그리고 특정 domain만을 cloning해서 ...
답변 2  |  2008.03.20
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