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실험Q&A    2,383건 정확도순 날짜순
Q. Western blot gel running 시 sample 퍼짐현상  |  첨부파일 첨부파일
Western blot gel running 시 sample 퍼짐현상이 나타납니다. 처음에 loading하고 stacking gel에서는 잘 내려가는 것 같아 보이는데 seperating gel에서 사진과 같은 현상이 나타납니다. 마치 번지듯한 현상입니다. Gel을 ...
A.  western 끝내고 band 현상 결과에서 band가 퍼지게 나오지 않으면 위 사진의 문제는 큰 영향 없을 것으로 생각됩니다. 일반적으로, SDS buffer에 들어있는 성분들이 protein 보다 먼저 내려오기 때문에 protein이 ...
답변 6  |  2016.05.09
Q. western blot 고수 분들 답변 부탁드립니다..  |  첨부파일 첨부파일
약 26 kda 정도 되는 단백질을 western blot을 활용하여 확인해보려고 ... 있구요... 원래 urine 특성이 gel %와 관계 없이 running이 되질 않는건지... 아니면 제가 sample 만드는 방법이 잘못된건지... 어떻게 해야 ...
A.  - 정제를 하면 결과가 달라질수 있기 때문에 저분자 물질만 제거하기 위해 3K filter를 사용합니다. - 전기영동 버퍼를 사용하는 것이 아니라 시료 용매를 버퍼로 바꾸기 위한 목적이고 20mM 중성 버퍼 또 ...
답변 12  |  2022.07.26
Q. western blot에서 gel 자를때 쓰는 도구
western blot에서 gel 자를때 쓰는 도구 칼처럼 생기거 그게 이름이 뭔가요? 그리고 혹시 대체로 쓸수 있는 도구가 있을까요? 많은 고수님들 답변부탁드립니다. 감사합니다.
A.  그냥 플라스틱으로 된 얇은 막대기면 됩니다. 철은 유리에 기스날 수 있으니까..... 15cm 자도 쓸만 합니다. 스페이서가 플라스틱으로 분리형 이면 그거 써도 되고요... 쉽게 쉽게 갑시다.
답변 3  |  2015.07.10
Q. western blot하는데 gel이 일어요
western blot을 셋업 중인데요, 프로토콜 따라서 running gel과 stacking gel까지 잘 만들긴 했는데요, running gel이 굳고 나서 보면 밑단 쪽에 젤이 일어요. 일렁일렁한 무늬가 꽤 크게 밑쪽에만 많이 생겼는데, ...
A.  만들기도 하고 종종 밴드가 개판(?)이 되게 합니다. sequencing gel을 만들때는 일부러 degasing과정이라고 해서 특별히 기포제거 과정을 거치기도 하거든요 ...
답변 4  |  2012.01.25
Q. Staining 된 gelWestern blot
추가로 2DE Western blot할게 갑자기 생겨서 sample이 남아 있는지 확인해보니 2DE를 하기에는 부족하고... 그래 ... 수도 있는데 혹시 staining 된 gel에서 Western blot을 해보신 분이 계시면 조언 부탁드립니다. ...
A.  . destain 잘해주시구요.. DW로 O/N 정도 rockering하셔서 gel을 담거주세요.. 100% transfer는 되지 않아도.. 어느정도는 되어집니다.. 그런데 양이 문제가 될거 같은데요.. 가지고 계신 antibody가 정말 괜찮다면 ...
답변 2  |  2009.07.20
Q. Western blot, Seperating gel vs stacking gel, tris buffer의 농도가 다른 이유가 궁금합니다.
western blot 공부하고 있는 학생입니다. 저희 실험실에서는 stacking gel에 1.5M Tris (pH6.8)을, seperating gel에 1M Tris (pH 8.8)을 사용하고 있습니다. pH가 다르게 해야 하는 이유는 구글링을 통해 공부하였으나 ...
A.  http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=127168&ksr=1&FindText=western%20tris%20%B3%F3%B5%B5 위 링크 참조해보세요~
답변 1  |  2016.01.18
Q. western blot결과와 gel두께와의 상관성
안티바디 등 동일한 조건에서 western blot을 했는데요, 밴드가 다르게 나타납니다. 1.5mm짜리 gel을 사용할때에 좀더 다르게 처리해야 하나요? 1.5mm 짜리는 좀더 많은 양의 샘플을 넣으려고 사용한 것입니다 ...
A.  제 생각 역시도 blocking이나 항체를 붙일때, 혹은 washing을 할때 불균형되게 수행되어 진 것은 아닌가 라는 생각을 갖게 하네요. 수평을 맞춰 충분히 membrane이 잠길 정도로 실험하시는 것이 좋습니다. 1. ...
답변 4  |  2009.09.16
Q. western blot SDS gel
안녕하세요. western blot을 하는 석사생입니다. gel을 만들어서 사용하고 있는데 running gel과 stacking gel 사이에서 버블이 만들어집니다. comb를 뽑으면서 젤 사이가 벌어지곤 하는데 왜이런 현상이 ...
A.   두 gel 사이에 틈이 생긴 현상인데 iPA를 확실하게 제거하는 것이 좋습니다. 세척 횟수를 늘여보세요. - comb도 항상 사용직전에 에탄올로 세척하여 comb을 제거할 떄 저항이 많이 발생하지 않게 해 주는 ...
답변 4  |  2022.08.10
Q. Western blot 할때 separating gel이 이상해요
할때는 잘만 되더니 오늘 다시 western blot을 하려고 10% separating gel을 20ml 만들었는데, 부어놓고 tube에 남은 gel이 30~40분이 지나도 도통 굳지를 않아서 다시 만들려고 분리를 해보니 부어놓았던 gel은 ...
A.  10% APS를 실온에서 보관하셨나요? 저도 gel이 갑자기 굳지않아 여러군데 찾아보았는데 APS는 냉동보관 해야하고 오랫동안 실온보관 할 경우 활성이 떨어진다고 하더라고요.. 그리고 gel이 굳는것은 ...
답변 6  |  2014.02.25
Q. western blot 할 때 SDS-PAGE gel이요
안녕하세요 western blot을 할 때 쓰는 8%gel을 2~3주전에 미리 만들어놓고 미리만들었던 gel과 오늘 새로만든 8%gel로 웨스턴을 했는데요~ 미리만들었던 gel 쪽에 sample이 새로만든 gel보다 더 빨리 ...
A.  전기영동할 때 1개 gel만 사용하기 때문에 정확히는 모르겠습니다만, 저도 한 번에 4-5개 gel 만들고 냉장 보관하여 사용을 하는데 2-3주 지나서 사용할 때도 있습니다. 그동안 오래된 gel을 사용했을 때 ...
답변 2  |  2018.04.26
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